在材料科学、食品胶体、乳液、蛋白聚集体、纳米颗粒等研究中，颗粒粒径及其分布是评价体系稳定性、分散性和微观结构的核心参数。相比动态光散射（DLS），ImageJ直接基于真实形貌，可区分团聚、异形颗粒及多峰分布，在SEM、TEM、CLSM、光学显微图像分析中具有不可替代性。

本期教程我们来学习使用Image J计算颗粒粒径及绘制粒径分布图。

1.打开Image J软件，跳出弹窗，如下图所示；

2.点击File—Open—选择打开目标的粒子SEM图；

3.依次点击Image—Type—8bit；

4.点击直线工具，对标尺进行设定，按住Shift临摹标尺；

5.点击Analyze—Set scale，在跳出的对话框，在Known distance和Unit of length 分别设置为尺寸，如50和μm；

6.点击Analyze—Tools—ROI Manager；

7.接着点击直线工具，对粒子进行绘制直径，在跳出的对话框，点击Add，接着勾选Show all；然后依次对各个粒子进行绘制直径，绘制完后，点击Measure;

8.在跳出的对话框，点击File—点击Save as，保存；

9.打开文件，复制length列数据；

10. 打开Graphpad软件，导入数据；

11.点击New Analysis—Normality and Lognormality Tests，在跳出的对话框，点击ok；

12.点击回到数据，点击Analyze—Frequency distribution—在跳出的对话框—在Graph—勾选Graph the results—在Graph type处，选择XYgraph，Histogram spikes;

13.点击左侧的Histogram of Data 1，右侧跳出柱状图；

14.接着点击Analyze—在xy analyses—Nonlinear regression（curve fit），在跳出的对话框，选择Gaussian—Gaussian；

在跳出的图形如下图所示：

15.接着对图形进行细节美化，其中包括柱状图颜色、曲线颜色、修改标题、坐标轴等，其最终效果图如下图所示：

ImageJ 做粒径分析其实很直观，就是把显微图里的颗粒“一个个识别出来”，再把它们的面积换算成等效直径，最后统计所有颗粒的大小分布。通过阈值分割和颗粒分析，不仅能得到平均粒径，还能清楚看出粒径分布是集中、分散还是存在团聚。再把导出的数据画成直方图或做高斯拟合，就可以直观展示体系的均一性和结构特征。大家都去试试吧！

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