作为研究细胞迁移能力的经典实验，细胞划痕实验通过模拟体内创伤修复过程，能直观反映细胞运动和增殖特性。

▍实验前准备

1、辅助标记

使用油性记号笔在6孔板底部绘制间距1cm的平行线，建议沿直径方向延伸至孔边缘，便于后续定位观察点

2、细胞铺板
推荐接种密度：75w/孔（6孔板），24h后需形成完整单层（无空隙）

▍标准化操作流程

Step1 划痕制备
垂直握持枪头，沿预划横线匀速施力划过细胞层（200ul黄色枪头）
全程保持枪头与板底垂直，同组孔使用同一枪头

Step2 清洗规范
沿孔壁缓慢加入预温PBS，轻柔漂洗3次
液流避免直冲细胞层，防止边缘细胞脱落

Step3 培养体系
更换含指定处理因素的低血清培养基（推荐＜2%）

Step4 数据获取
以横线与划痕交点为固定监测位，划痕后立即拍摄0h基准图像，6/12/24h依次拍照（根据细胞类型调整），保持各时间点视野一致。

当细胞层厚度＞20μm时，采用Z-stack叠加拍摄（步进2μm，3层叠加）

▍Image J 数据分析

（1）Image >- Type >- 8-bit

（2）Image >- Adjust >- Threshold

（3）选择BW模式

BW模式（Black & White二值化模式）是通过阈值分割将灰度图像转换为仅含黑白两种颜色的处理方式，细胞区域→白色（255），划痕区域→黑色（0）

（4）Analyze >- Measure

（5）细胞迁移率计算

细胞迁移率=(初始划痕面积-最终划痕面积)/初始划痕面积×100%

比如6h后测得面积是50000，则6h的细胞迁移率就是（66122-50000）/ 66122 = 24.38%

（6）迁移率绘图

如果，A组依次是24.38%、20.03%、18.95%，B组依次是25.75%、22.52%、17.63%。这里使用GraphPad作图，图形尚未美化。数据表明，B的迁移率明显增强。